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BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū) 

微量法

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定，確保蛋白濃度在20-2000μg/ml內(nèi)。

貨號(hào)：YX-W-C202

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑A：液體×1瓶，4℃保存。 

試劑B：液體×1支，4℃保存。 

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，4℃保存。 

產(chǎn)品說(shuō)明：

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。 測(cè)定原理： 堿性條件下，蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將Cu2+還原成Cu+；2分子的BCA與Cu+結(jié)合，生成紫色絡(luò)合物，在540-595nm有吸收峰，562nm處吸收峰ZUI強(qiáng)。 自備儀器和用品： 

臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。 

工作液配制：臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×0.2mL），將試劑A和B按照50：1的比例混合，蓋緊后充分混勻。 

操作步驟：

一、樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取： 

1. 液體樣品：澄清液體樣品可以直接測(cè)定。 

2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水），冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測(cè)液。（動(dòng)物樣品常常需要稀釋?zhuān)?/span> 

3. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。 

二、測(cè)定操作： 

1. 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到562 nm，蒸餾水調(diào)零。

• 工作液置于60℃水浴預(yù)熱30 min。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。 

三、計(jì)算公式： 

Cpr (mg/mL)= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管） 

=0.5×（A測(cè)定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）

注意事項(xiàng)：

• BCA 法蛋白含量測(cè)定試劑盒，適用于測(cè)定蛋白濃度在20-2000μg/ml 樣品。測(cè)定前取1-2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，樣品蛋白含量太高的話，請(qǐng)稀釋至相應(yīng)濃度范圍內(nèi)，以確保測(cè)定的準(zhǔn)確性。 
• 待測(cè)樣品蛋白提取可用生理鹽水、蒸餾水或PBS 提取。 
• 由于受測(cè)定溫度及時(shí)間等的影響，請(qǐng)嚴(yán)格按照給定條件測(cè)定。

本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！

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