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DH5α 感受態(tài)細胞
點擊次數:4576 更新時間:2020-02-11

DH5α 感受態(tài)細胞

 

 


儲存條件:-70℃保存,避免反復凍融。

 

組成 YBC102-01 BC102-02

DH5α Competent cells 10×100µl 20×100µl pUC190.1ng/µl 5µl 5µl

產品介紹:

本公司生產的 DH5α感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌 DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,可用于

DNA 的化學轉化。使用 pUC19 質粒檢測,轉化效率可達 108 cfu/µg,-70℃保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。每支感受態(tài)可以酌情分裝使用,降低了實驗的成本。質量穩(wěn)定,使用方便,質優(yōu)價廉。

基因型:

 

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

 

產品特點:

一種用于鋪制與培養(yǎng)質粒平板和粘粒平板的重級缺陷的抑制型株。其φ80 lacZΔM15  基因的產物可與 pUC

載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補,可用于藍白斑篩選。操作步驟(以下操作均按無菌條件的標準進行):

提示

感受態(tài)細胞應保存在-70℃,不可多次凍融和放置時間過長,以避免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。

進行轉化操作時,應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。

為防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接反應液,以重新轉化,將損失降到低。

1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中,如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中,置于冰浴中。

(一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100μl,可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。以下實驗以 100μl 感受態(tài)細胞為例。)

2. 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA  ,輕輕旋轉離心管以混勻內容物,在冰浴中靜置 30 分鐘。

  • 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒,然后快速將管轉移到冰浴中,使細胞冷卻 2 分鐘,該過程不要搖動離心管。此步驟也可將離心管置于室溫進行,時間不需十分準確,夏季或室溫較高時,可放置 5-8 分鐘左右;如果室溫較低,可延長時間至 8-15 分鐘左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法。)

 

4. 向每個離心管中加入 500μl 無菌的 SOC LB 培養(yǎng)基(不含抗生素,混勻后置于 37150rpm,搖床振蕩培養(yǎng) 60 分鐘,目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,使菌體復蘇。

5. 無菌條件下,取適量菌液加到含相應抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上,用無菌的細菌涂布器或玻璃珠將細胞均勻涂開。等平板中的液體*吸收后,倒置平板,37℃培養(yǎng) 12-16 小時。(涂布用量可根據具體實驗來調整。轉化質粒在 10ng 左右,90mm 平皿涂布 100µl55mm 平皿涂布 50µl;連接產物的轉化菌液建議離心后倒掉大部分上清,余 200µl,取 100µl 用于涂布。)

6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中,視平板上菌落生長情況決定去留。

質??焖俎D化步驟:將步驟 2 的時間縮短到 5 分鐘,對于氨芐青霉素抗性的質粒,步驟 3 完成后,可直接涂布或劃線于含氨芐青霉素抗性的LB 平板上。其它抗性的質粒仍需 60 分鐘的復蘇培養(yǎng)。)

相關試劑及培養(yǎng)基的制備方法:

 

LB 液體培養(yǎng)基:稱取 10g,Tryptone,5g Yeast Extract 10g NaCl 置于 1L 燒杯中。加入約 800ml 的去離子水,*溶解后用 2mol/L NaOH 溶液調節(jié) pH 值至 7.0。加去離子水定容至 1L。分裝后,121高壓滅菌 20 分鐘。

2. SOB SOC 培養(yǎng)基:稱取 20g Tryptone5g Yeast Extract,0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的去離子水,*溶解后再補加 10ml 250mM KCl 溶液,滴加 5M NaOH0.2ml調 pH 7.0。加入去離子水將培養(yǎng)基定容至 1L。121℃滅菌 20 分鐘。使用時加入 5ml 滅菌的 2M MgCl2 (此種培養(yǎng)基稱為SOB。再補加經 0.22um 過濾除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml此種培養(yǎng)基為 SOC)。

3. 轉化復蘇細菌用的液體 LB 培養(yǎng)基或SOC 培養(yǎng)基:可以一次高壓 50ml 液體培養(yǎng)基,無菌狀態(tài)按 1ml 每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中,裝于自封袋中,凍存于-20℃中,每次用一支。可以極大地避免培養(yǎng)基污染和減少勞動量。

4. LB 固體選擇培養(yǎng)基:100ml LB 液體培養(yǎng)基中加入 1.5g 瓊脂粉,搖勻后,121℃高壓滅菌 20 分鐘。冷卻至 50℃左右時加入相應濃度的抗生素(AMP 濃度通常為 100ug/ml),混勻后倒在細菌用的無菌養(yǎng)皿中,等瓊脂凝固后即可使用。

5. IPTG:稱量 1.9g IPTGMW=238.31充分溶解于 40 ml 滅菌水,濃度為 200mmol/L。用無菌 0.22μm

過濾膜過濾除菌。小份分裝后,-20℃保存。

6. X-gal:用DMF(二甲基甲酰胺)配制成 20mg/ml,小份分裝(1ml/份)后,-20℃避光保存

高純度質粒小量快速提取試劑盒

PCR 產物純化回收試劑盒說明

 

滬公網安備 31011802001678號

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