脲酶（UE）活性檢測試劑盒說明書

注意：正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預測定。

 規(guī)格：100T/48S 產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存，臨用前加3mL蒸餾水充分溶解； 試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存；

試劑三 A 液：液體 0.4mL×1 支，4℃保存；

試劑三 B 液：液體 1.6mL×1 瓶，4℃保存；臨用前將 A 液倒入 B 液中混合，待用； 試劑四：液體 2mL×1 瓶，4℃保存；

標準品：液體 1mL×1 支，4℃保存。1mg/mL 氮標準液。

產(chǎn)品說明：

微量法

脲酶（UE）廣泛分布于植物的種子中，也存在于動物的血液和尿液中，某些微生物也能分泌脲酶。UE能夠水解尿素產(chǎn)生氨和碳酸，對尿素轉(zhuǎn)化起關鍵作用。利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH3-N來反應UE活性。

自備實驗用品及儀器：

可見分光光度計/酶標儀、天平、研缽/勻漿器、低溫離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

操作步驟： 一、樣品處理

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5-10  的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液），冰上勻漿后于4℃，12000g 離心15min，取上清待測。

• 細胞/細菌：按照細胞/細菌數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500-1000：1 的比例（建議500 萬個細胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率300w，超聲3 s，間隔7 s，總時間3min）； 然后4℃，12000g 離心15min，取上清置于冰上待測。

3. 血清（漿）或其它液體：直接檢測。二、測定操作：

1、可見分光光度計/酶標儀預熱 30min，波長調(diào)至 630nm，可見分光光度計蒸餾水調(diào)零。

2、將 1mg/mL 氮標準液用蒸餾水稀釋至 2µg/mL 備用。

3、加樣表：

第 1頁，共 2 頁

三、計算公式：

1、液體中UE活力的計算：

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個酶活力單位。

UE（U/mL）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷V樣÷T

=0.233×?A測定÷?A標準。

2、組織、細菌或細胞中UE活力的計算：

（1） 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個酶活力單位。

UE活力（U/mg prot）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(V樣×Cpr)÷T

=0.233×?A測定÷?A標準÷Cpr。

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個酶活力單位。

UE活力（U/g鮮重）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(W× V樣÷V提取)÷T

=0.233×?A測定÷?A標準÷W。

（3） 按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1百萬個細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個酶活力單位。

UE活力（U /106 cell）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(細胞數(shù)量×V樣÷V提取) ÷T

=0.233×?A測定÷?A標準÷細胞數(shù)量。

C標準液：標準液濃度，2µg/mL；T：反應時間，60min；V酶促：酶促反應體系總體積，0.14mL；

V樣：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V提取：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；

W：樣本質(zhì)量，g；細胞數(shù)量：以百萬計。注意事項：

1. ?A測定大于0.6時，建議將反應混合液用蒸餾水稀釋或者樣品用蒸餾水稀釋后在進行測定。

小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細胞瘤細胞(G422)培養(yǎng)說明書